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关键词： 艾灸   动脉粥样硬化   线粒体自噬   脂肪酸氧化   脂质蓄积   内皮功能  

摘要： 背景:动脉粥样硬化是心血管疾病的核心病理基础,与脂质代谢紊乱和内皮功能障碍密切相关。前期研究发现艾灸可有效保护线粒体形态及功能,抑制细胞凋亡。目的:探讨艾灸通过介导线粒体自噬调节脂肪酸氧化抗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法:将30只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组、艾灸组和艾灸+Mdivi-1组,每组10只,高脂饲料饲养12周复制动脉粥样硬化模型;10只雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,普通饲料饲养。各组小鼠均在造模第1天开始干预,对照组、模型组仅抓取固定,艾灸组在“膻中”“神阙”及双侧“内关”“血海”穴进行艾灸干预,每次30 min,每周连续5次;艾灸+Mdivi-1组在艾灸前30 min腹腔注射线粒体分裂抑制剂1[Mdivi-1,1.2 mg/(kg·d)],每周连续注射5 d,连续治疗12周后取材。用酶法测定血清三酰甘油、总胆固醇浓度,用比色法测定血清低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇浓度;苏木精-伊红染色法观察小鼠胸主动脉及肝脏病理形态,油红O染色观察小鼠肝脏脂质变化,酶联免疫吸附试验检测小鼠肝脏中CPT1α、MCAD及血清内皮素1水平,硝酸还原酶法检测小鼠血清一氧化氮浓度,蛋白免疫印迹法检测小鼠肝脏组织BNIP3、becline-1、TOMM20蛋白表达及小鼠胸主动脉组织中内皮型一氧化氮合酶、磷酸化内皮型一氧化氮合酶蛋白表达。结果与结论:①与对照组比较,模型组小鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇浓度均显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇水平明显降低(P<0.05);胸主动脉血管内壁不平整,内膜增厚,基质溶解;肝脏组织细胞肿胀变圆,出现肝细胞点状坏死,中性粒细胞浸润,可见较多的脂肪空泡及脂肪变性;小鼠肝脏油红O染色亦显示大量脂滴蓄积;肝脏组织中CPT1α、MCAD含量及BNIP3、Becline-1蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01),TOMM20蛋白表达量明显升高(P<0.05);小鼠血清中一氧化氮浓度显著降低(P<0.01),内皮素1质量浓度显著增加(P<0.01),胸主动脉组织中内皮型一氧化氮合酶、磷酸化内皮型一氧化氮合酶蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01)。②与模型组比较,艾灸组小鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇浓度显著降低(P<0.01);胸主动脉管腔较规则,中膜排列较为整齐;肝脏组织细胞肿胀显著减轻,纹理清晰,脂滴沉积减少;油红O染色显示脂滴蓄积显著减少;肝脏组织中CPT1α、MCAD含量及BNIP3、Becline-1蛋白表达量显著增加(P<0.05,P<0.01),TOMM20蛋白表达量明显降低(P<0.05);小鼠血清中一氧化氮浓度显著升高(P<0.01),而内皮素1质量浓度显著降低(P<0.01),胸主动脉组织中内皮型一氧化氮合酶、磷酸化内皮型一氧化氮合酶蛋白表达升高(P<0.01)。③与艾灸组相比,艾灸+Mdivi-1组小鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇浓度显著增加(P<0.05,P<0.01);胸主动脉血管内壁稍不平整,内膜增厚,有少量泡沫细胞;肝脏组织细胞肿胀加重;肝脏组织油红O染色示脂滴蓄积增加;肝脏组织中CPT1α、MCAD含量及BNIP3、Becline-1蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01);小鼠血清中一氧化氮浓度下降(P<0.05),而内皮素1质量浓度显著增加(P<0.01),胸主动脉组织中内皮型一氧化氮合酶、磷酸化内皮型一氧化氮合酶蛋白表达下降(P<0.01)。④结果表明,艾灸可改善ApoE^(-/-)小鼠血脂水平、脂肪酸氧化、脂质蓄积,恢复内皮损伤,减轻动脉粥样硬化症状,其机制可能与调控线粒体自噬影响脂肪酸氧化减少肝脏组织脂质蓄积水平、改善主动脉内皮功能障碍有关。

关键词： 生物信息学   机器学习   动脉粥样硬化   线粒体功能障碍   铁死亡   免疫细胞   中药  

摘要： 背景:线粒体功能障碍和铁死亡广泛参与了动脉粥样硬化的发病,研究动脉粥样硬化发病过程中线粒体功能障碍与铁死亡相关生物标志物对该病的诊断与治疗具有重要意义。目的:基于生物信息学和机器学习算法,探究动脉粥样硬化发病过程中线粒体功能障碍与铁死亡相关生物标志物,并预测潜在调控中药。方法:从GEO数据库(由美国国立生物技术信息中心于2000年开发的基因表达数据库,收录并整理了全球研究机构和科研工作者提交的基因表达数据)获取动脉粥样硬化疾病数据集GSE100927,并筛选差异表达基因,基于差异基因开展免疫浸润分析。利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)获得动脉粥样硬化相关的关键模块基因,将关键模块基因与线粒体功能障碍基因、铁死亡基因以及差异表达基因取交集,基于交集基因对疾病组数据共识聚类分析,鉴定每个聚类亚型之间的差异基因。对差异基因进行富集分析,基于最小绝对收缩和选择算子与随机森林等机器学习方法筛选Hub基因。进一步使用RAW264.7细胞构建动脉粥样硬化细胞模型,基于qPCR对Hub基因进行验证,使用数据库进行Hub基因调控的中药预测。结果与结论:①将差异表达基因、WGCNA模块基因,线粒体功能和铁死亡特征基因取交集得到5个交集基因,基于这5个基因进行共识聚类分析得到2个亚型,亚型之间的差异分析得到994个线粒体功能与铁死亡相关亚型差异表达基因。通过2种机器算法预测出3个Hub基因,分别为DMTN、FCGR3A与MGST1,结合细胞实验验证后发现DMTN、MGST1可能具有较高的诊断价值。中药预测结果显示,当归、肉桂等中药可能是DMTN、MGST1的调控中药。②结果表明,DMTN、MGST1基因对动脉粥样硬化有一定诊断价值,还可作为动脉粥样硬化发病过程中线粒体功能障碍与铁死亡相关的特征基因,当归、肉桂等中药作为调控以上基因的药物具有一定研究潜力。

关键词： 高血压脑出血   认知功能障碍   新型炎症指标   列线图预测模型   影响因素   Lasso回归  

摘要： 背景:目前多基于Logistic回归构建卒中后认知功能障碍预测模型,联合Lasso回归筛选变量来避免共线性及过拟合的相关研究较少。目的:探索高血压脑出血后认知功能障碍发生的相关因素,基于LASSO回归构建列线图预测模型并进行验证。方法:选择2022年8月至2024年8月贵州医科大学附属医院急诊神经内科收治的高血压脑出血患者260例,其中卒中后认知功能障碍组127例,卒中后非认知功能障碍组133例。采用Lasso-logistic回归优化模型的特征选择,基于R studio软件按照7∶3随机将所有队列分为训练集182例和验证集78例,根据独立危险因素建立训练集风险预测列线图模型,并用受试者工作特征曲线评估模型区分度,Hosmer-Lemeshow拟合优度检验和校准曲线评估模型校准度,决策分析曲线评估模型临床获益。结果与结论:①Lasso-logistic回归分析显示,年龄(OR=1.112,95%CI=1.068-1.157,P=0.000)、脑血肿直径(OR=2.021,95%CI=1.025-3.983,P=0.042)、血肿破入脑室(OR=2.398,95%CI=1.149-5.006,P=0.020)、手术(OR=2.542,95%CI=1.278-5.056,P=0.008)、血肌酐值(OR=1.017,95%CI=1.004-1.031,P=0.010)是高血压脑出血患者发生认知功能障碍的独立危险因素;②受试者工作特征曲线分析显示训练集和验证集的列线图预测模型曲线下面积分别为0.826(95%CI 0.765-0.885)和0.795(95%CI 0.693-0.898);③Hosmer-Lemeshow拟合优度检验和校准曲线分析显示列线图模型拟合良好,训练集的χ^(2)=12.710,P=0.122(P>0.05);验证集的χ^(2)=4.328,P=0.826(P>0.05);④临床决策曲线显示模型有较好的临床净获益;⑤结果表明:基于年龄、脑血肿直径>3 cm、血肿破入脑室、手术以及血肌酐值等预测因素建立的列线图模型对高血压脑出血3个月后发生认知功能障碍具有一定预测价值。

关键词： 巨噬细胞   类风湿关节炎   极化   骨与关节   自身免疫   炎症   M1巨噬细胞   M2巨噬细胞  

摘要： 背景:类风湿关节炎是以持续性滑膜炎和进行性骨破坏为主要病理特征的慢性自身免疫性疾病。巨噬细胞作为关键的效应细胞,主要通过极化成不同功能表型,在类风湿关节炎发病机制中发挥核心作用。目的:综述巨噬细胞极化在类风湿关节炎骨破坏中的作用及调控机制和最新治疗进展。方法:利用计算机检索Web of Science核心数据库、万方数据库和中国知网2005-2024年期间发表的相关文献。中文检索词为“巨噬细胞,类风湿关节炎,极化,骨与关节,软骨,自身免疫,炎症,M1巨噬细胞,M2巨噬细胞”,英文检索词为“macrophages,rheumatoid arthritis,polarization,bone and Joints,cartilage,autoimmunity,inflammation,M1 macrophage,M2 macrophage”,最终对53篇文献展开综述。结果与结论:类风湿关节炎是一种慢性炎症性疾病,以持续炎症性骨破坏为特征,如果治疗不当,可导致关节畸形,甚至功能丧失。巨噬细胞M1/M2极化比例失衡是类风湿关节炎疾病进展的关键点,这强调了研究巨噬细胞极化在类风湿关节炎炎症性骨破坏中的作用及调控机制的必要性,巨噬细胞极化调控机制能够作为新型治疗剂的潜在靶点。

关键词： α-突触核蛋白   轴突导向因子   帕金森病   多巴胺能神经元   Netrins   Ephrins   Semaphorins   Slits  

摘要： 背景:轴突导向因子可能在α-突触核蛋白相关神经退行性疾病中发挥重要作用。目的:探讨轴突导向因子在α-突触核蛋白相关神经退行性疾病中的作用及机制。方法:由第一作者系统检索中国知网、万方数据库、PubMed、Nature、Embase、Web of Sciense、JAMA、BMJ等数据库,中文检索词为“帕金森病,轴突导向因子,路易体痴呆,多系统衰竭,单纯性自主神经功能衰竭”,英文检索词为“Parkinson’s disease,axon guidance molecules,Netrin,Ephrin,Semaphorin,Slit,Dementia with Lewy Bodies,Multiple System Atrophy,Pure Autonomic Failure”,全面收集并整理近年来有关轴突导向因子与α-突触核蛋白相关神经退行性疾病的文献,最终纳入89篇文献进行综述分析。结果与结论:轴突导向因子蛋白家族包括Netrins、Ephrins、Semaphorins和Slits。Netrins通过影响肠道因子、依赖DCC受体调节多巴胺能神经元活力,进而影响神经退行性疾病进程。在Ephrins家族中,EphrinA/EphA参与介导神经元再生信号,EphA1借CXC趋化因子配体12/CXC趋化因子受体4通路调节炎症与神经病理,影响疾病发展。Semaphorins家族中的Semaphorins-3通过引导多巴胺能神经元轴突从黑质向纹状体生长,进而改善神经退行性疾病的行为学症状。在多巴胺能神经元轴突传导通路上,Slits经Slit/Robo等信号协作调控轴突定位与寻路过程,确保神经元信号传导路径的准确性,对神经元连接的维持与修复具有重要意义。

关键词： 阿霉素   心肌损伤   炙甘草汤   细胞凋亡   氧化应激   线粒体损伤   工程化组织构建  

摘要： 背景:临床研究显示甘草汤可有效改善阿霉素导致的心肌损伤症状和体征,保护心功能,但其具体作用机制尚不明确。目的:探讨炙甘草汤保护阿霉素诱导心肌损伤的作用及机制。方法:①在PharmMapper、TCMSP、PubChem和BATMAN-TCM数据库中获得炙甘草汤的靶点,通过MitoCarta 3.0获取线粒体相关基因,通过GEO数据库筛选心肌损伤相关靶点,筛选交集基因。②细胞实验:取30只SD大鼠,给予12.15 g/(kg·d)炙甘草汤灌胃(分2次给药),连续给药3 d。末次给药2 h后腹主动脉采血,分离血清,即得含药血清。将第10代大鼠心肌细胞(H9C2细胞)分5组干预:对照组不进行任何干预,模型组添加阿霉素干预48 h,低、中、高剂量含药血清组分别添加5%,10%,20%含药血清干预6 h,再添加阿霉素干预48 h。干预结束后,检测细胞上清乳酸脱氢酶与肌酸激酶水平、Caspase-7蛋白表达、细胞线粒体超微结构、细胞凋亡、活性氧水平及α-actinin的定位和分布。③动物实验:将30只C57BL/6小鼠随机分5组干预,每组6只:对照组皮下注射生理盐水,模型组及低、中、高剂量炙甘草汤组腹腔注射阿霉素(每周1次,连续注射4周)建立心肌损伤模型,同时,低、中、高剂量炙甘草汤组分别给予8.775,17.55,35.12 g/kg炙甘草汤灌胃(每天1次,连续给药4周),对照组与模型组给于生理盐水灌胃。末次给药结束后,检测小鼠左室射血分数、血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平、心肌组织结构变化、心肌细胞凋亡与心肌组织Caspase-7蛋白表达。结果与结论:①炙甘草汤靶点、心肌损伤靶点、线粒体相关基因韦恩图显示,Caspase-7为交集基因;②细胞实验:与模型组比较,中、高剂量含药血清组细胞上清乳酸脱氢酶与肌酸激酶水平、活性氧水平、细胞凋亡及Caspase-7、α-actinin蛋白表达显著降低,细胞线粒体超微结构损伤明显减轻;③动物实验:与模型组比较,中、高剂量炙甘草汤组血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平、心肌细胞凋亡与Caspase-7蛋白表达显著降低,左室射血分数升高,心肌组织结构明显改善;④结果表明,炙甘草汤可在一定程度上防治阿霉素诱导的心肌损伤,主要表现在减轻氧化应激和线粒体损伤、抑制心肌细胞凋亡、保护心功能和改善心肌组织结构,在抑制内源性凋亡途径方面,Caspase-7可能是炙甘草汤的作用靶点。

关键词： 瓜蒌   类外泌体囊泡   NLRP3炎症小体   动脉粥样硬化   炎症反应   高效液相色谱-质谱   网络药理学   冠心病  

摘要： 背景:瓜蒌具有抗氧化功能和抗炎作用,常用于治疗心血管疾病。然而,瓜蒌的疗效往往受到成分复杂和生物利用度低的限制。目的:探讨瓜蒌类外泌体囊泡防治动脉粥样硬化的生物学机制。方法:①采用密度梯度离心法从瓜蒌中提取细胞外囊泡,通过透射电镜、纳米粒径检测仪与纳米颗粒追踪分析仪鉴定,共聚焦扫描显微镜观察THP-1来源巨噬细胞摄入瓜蒌类外泌体囊泡情况。②THP-1来源巨噬细胞随机分为空白组、模型组及瓜蒌类外泌体囊泡低、中、高剂量组,其中空白组正常培养,模型组加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白,瓜蒌类外泌体囊泡低、中、高剂量组加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白和5,10,20 mg/L瓜蒌类外泌体囊泡,干预24 h,采用Western blot检测细胞NLRP3和Cleaved-Caspase-1表达水平。③33只Apoe^(-/-)小鼠随机分为空白组、模型组和瓜蒌类外泌体囊泡组,其中空白组小鼠喂养普通饲料,其余2组小鼠喂养高脂饲料16周后,瓜蒌类外泌体囊泡组小鼠腹腔注射瓜蒌类外泌体囊泡,空白组与模型组小鼠腹腔注射生理盐水,隔日给药1次,连续4周,采用油红O染色检测主动脉斑块面积,苏木精-伊红染色观察主动脉组织病理变化,ELISA检测血清白细胞介素1β、白细胞介素18水平,试剂盒检测血脂水平,免疫组化检测主动脉NLRP3和Cleaved-Caspase-1表达水平。④高效液相色谱-质谱联用技术与网络药理学预测瓜蒌类外泌体囊泡治疗冠心病的潜在靶点。结果与结论:①瓜蒌类外泌体囊泡呈茶托状,粒径在50-150 nm之间,能被THP-1来源巨噬细胞有效摄入;②细胞实验显示,与模型组相比,瓜蒌类外泌体囊泡低、中、高剂量组NLRP3和Cleaved-Caspase-1表达水平呈浓度依赖型降低;③小鼠实验显示,与模型组相比,瓜蒌类外泌体囊泡组小鼠主动脉斑块面积减少,炎症细胞浸润较少,三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平下降,高密度脂蛋白胆固醇水平升高,NLRP3及Cleaved-Caspase-1蛋白表达降低;血清白细胞介素1β、白细胞介素18水平降低;④筛选并富集到的关键通路有HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路、代谢通路、脂质和动脉粥样硬化通路等。结果表明,瓜蒌类外泌体囊泡可有效缓解小鼠动脉粥样硬化,作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体介导的炎症反应有关。

关键词： 脱细胞真皮基质   脂肪间充质干细胞   外泌体   烧伤   皮肤   炎症   凋亡   创面愈合  

摘要： 背景:脱细胞真皮基质、脂肪间充质干细胞外泌体均可促进创面修复,但二者联合应用于烧伤创面是否有治疗效果目前尚缺乏研究。目的:探讨脱细胞真皮基质联合脂肪间充质干细胞外泌体对深Ⅱ度烧伤创面愈合的促进作用。方法:取40只SD大鼠,制作深Ⅱ度烧伤创面,随机分为对照组、脱细胞真皮基质组、脂肪间充质干细胞外泌体组、脱细胞真皮基质+脂肪间充质干细胞外泌体组(以下简称为联合组),每组10只。给予相应治疗后,观察创面愈合情况,治疗2,8,14 d取创面组织行病理组织学观察及免疫组织化学染色,治疗2 d行免疫荧光染色及TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果与结论:①治疗14 d,联合组创面愈合率及愈合面积均高于其他3组(P<0.05);②苏木精-伊红染色显示,与其他3组比较,联合组创面上皮化更完整,胶原纤维排列更整齐;Masson染色显示,与其他3组比较,联合组胶原纤维含量增多(P<0.01);③免疫组化显示,联合组促炎症因子表达低于其他3组(P<0.01);抗炎症因子表达高于其他3组(P<0.01);联合组新生血管多于其他3组(P<0.01);④免疫荧光显示,联合组BAX和Caspase3平均荧光强度低于其他3组(P<0.01);而BCL-2平均荧光强度高于其他3组(P<0.01);⑤TUNEL染色显示,联合组凋亡指数低于其他3组(P<0.01)。结果表明,脱细胞真皮基质+脂肪间充质干细胞外泌体联合治疗可促进胶原纤维再生,抑制炎症反应及细胞凋亡,加快烧伤创面的愈合。

关键词： 间充质干细胞   动脉粥样硬化   下肢动脉硬化闭塞症   溃疡愈合   外泌体   临床疗效   Meta分析   随机对照试验  

摘要： 目的:系统评价间充质干细胞治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床疗效。方法:计算机检索PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane Library、Scopus、Google Schola、中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库,检索间充质干细胞治疗下肢动脉硬化闭塞症的随机对照试验,检索时限均从各数据库建库至2024年7月。按照制定的纳入和排除标准进行文献筛选、提取相关资料。使用RevMan 5.3软件对纳入文献进行Meta分析,包括截肢率、无截肢生存率、溃疡愈合率、踝肱指数、经皮氧分压以及无痛行走距离。结果:共纳入9个随机对照试验。Meta分析结果显示:与对照组比较,间充质干细胞治疗组患者无截肢生存率[RR=1.23,95%CI(1.07,1.42),P=0.004]、截肢率[RR=0.55,95%CI(0.35,0.85),P=0.007]、溃疡愈合率[RR=1.95,95%CI(1.51,2.52),P<0.001]、踝肱指数[MD=0.16,95%CI(0.13,0.19),P<0.001]、经皮氧分压[SMD=1.62,95%CI(0.87,2.37),P<0.001]以及无痛行走距离[MD=131.81,95%CI(3.56,260.06),P=0.04]均有显著改善,但死亡率[RR=1.13,95%CI(0.62,2.06),P=0.68]差异无显著性意义。结论:间充质干细胞对下肢动脉硬化闭塞症的部分临床指标有改善趋势。但由于纳入文献的局限性,未来尚需更多高质量、多中心、大样本的随机对照试验验证。

关键词： PC12细胞   微小RNA   慢病毒载体   质粒   miR-122-5p   稳转细胞株   神经系统疾病   缺血性脑卒中  

摘要： 背景:MicroRNA-122-5p(miR-122-5p)作为微小RNA(miRNA)家族中的关键成员,在调控基因表达及多种疾病的发生发展中扮演着重要的角色,然而其确切的作用机制尚未完全阐明。构建稳定的miR-122-5p高/低表达PC12细胞模型,可为深入研究miR-122-5p在神经系统疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:旨在构建高/低表达大鼠miR-122-5p慢病毒载体,并以此建立稳定高/低表达miR-122-5p的PC12细胞株,为进一步研究miR-122-5p在神经系统疾病中的作用奠定基础。方法:根据miR-122-5p基因序列设计合成引物,通过PCR扩增该基因片段。将目的基因定向接入经AgeI/NheI酶切的载体质粒GV369中,构建重组慢病毒质粒。筛选阳性克隆,并进行测序比对结果。将质粒载体与目的质粒载体同293T细胞共培养转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定。通过体外培养PC12细胞,确定嘌呤霉素工作浓度。慢病毒分别与PC12细胞共培养,确定转染效率,用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,RT-qPCR法检测稳定转染细胞株的miR-122-5p表达量。结果与结论:①测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功,高表达慢病毒滴度为4×10^(8)TU/mL,miR-122-5p低表达慢病毒滴度为1×10^(9)TU/mL;②PC12细胞嘌呤霉素工作浓度为3.5μg/mL;③高表达miR-122-5p慢病毒转染PC12细胞的最佳条件为HiTransG P转染增强液,且感染复数值=10;感染复数值=50时低表达miR-122-5p效率最高;④RT-qPCR结果显示,高表达稳转细胞株中miR-122-5p的表达量有明显升高,而低表达稳转细胞株中miR-122-5p表达量显著降低;⑤此次研究成功构建了高/低表达miR-122-5p慢病毒载体,并获得稳转PC12细胞株,为miR-122-5p在神经系统疾病中的进一步研究提供了实验基础。