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关键词： 黄连解毒汤   阿尔茨海默病   神经炎症   细胞焦亡   NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路  

摘要： 目的：探讨黄连解毒汤通过NOD样受体蛋白3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）通路抑制阿尔茨海默病（AD）小鼠细胞焦亡和神经炎症的作用机制。方法：将30只APP/PS1双转基因小鼠随机均分为模型组（Model组）、阳性对照组(Donepezil组，0.65mg·kg-1)、黄连解毒汤治疗组(HLJDD组，5.2g·kg-1)；10只C57BL/6小鼠为空白组（control组）。采用Morris水迷宫和新物体识别实验评估小鼠学习记忆能力；采用尼氏染色观察小鼠海马区神经元形态、数目及分布情况；采用高尔基染色观察小鼠海马区神经元突触形态及密度；采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测小鼠海马区神经炎症相关因子及细胞焦亡通路NLRP3/Caspase-1/GSDMD的基因表达情况；采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测突触后致密蛋白95（PSD95），淀粉样前体蛋白（APP），炎症相关因子核因子κB（NF-κB）、p-NF-κB、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）及焦亡通路NLRP3、Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N的表达情况。结果：与Control组比较，Model组小鼠小鼠学习记忆能力显著下降（P＜0.01）；海马CA3区神经元数量和海马CA1区树突棘数量明显减少（P＜0.01）；海马组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平显著升高（P＜0.01）；海马组织中PSD95蛋白表达水平显著降低，NLRP3、Caspase-1、GSDMD、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、IL-1β、APP表达水平显著升高（P＜0.01）。与Model组比较，Donepezil组和HLJDD组小鼠学习记忆能力显著升高（P＜0.05，P＜0.01）；海马CA3区神经元数量和海马CA1区树突棘数量明显增加（P＜0.01）；海马组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；海马组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、IL-1β、APP表达水平显著下降，PSD95水平显著升高（P＜0.05，P＜0.01），Donepezil组GSDMD-N水平差异无统计学意义，HLJDD组GSDMD-N表达水平下降（P＜0.05）。结论：本研究证实黄连解毒汤能够改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力，抑制了神经元丢失和突触损害，这可能是通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD途径抑制细胞焦亡来发挥作用的。

关键词： 降阶单元   边值问题   最大模   一维问题   自适应有限元  

摘要： 新近提出的降阶单元的自适应有限元法，已在一系列初值问题和边值问题中取得成功，但尚缺乏与其他类似的自适应有限元法较为详细全面的对比分析。该文以一维非自伴随边值问题为模型问题，在最大模的度量下，同时考察现有的四种相类似的一维自适应有限元算法，进行对比计算和分析，总结参比方法的优劣。本文的对比分析表明：作为自适应有限元分析方法，特别是从局部加密功能和性能来看，降阶单元原理简明、算法简单，在可靠、通用和计算效率等方面，均优于其他方法。

关键词： 胃癌   类器官   成纤维细胞   共培养模型   药物敏感检测  

摘要： 目的体外构建胃癌类器官-肿瘤相关成纤维细胞的共培养模型，利用该模型探究肿瘤相关成纤维细胞对胃癌类器官增殖与化疗耐药的影响。方法收集12例胃癌患者的肿瘤组织，体外培养构建胃癌类器官及同一患者来源的肿瘤相关成纤维细胞，并分别通过形态学、免疫组化及流式细胞术进行鉴定。将胃癌类器官与肿瘤相关成纤维细胞按1∶1比例共培养，观察胃癌类器官的生长情况。在共培养体系中加入化疗药物5-氟尿嘧啶和奥沙利铂处理48 h，利用CellTiter-Glo?3D和Caspase-3/7分别检测类器官的活力与凋亡情况。结果成功构建了同一患者来源的胃癌类器官与肿瘤相关成纤维细胞的共培养模型，胃癌类器官表现出与原发肿瘤一致的形态学特征以及细胞角蛋白CK7、癌胚抗原CEA、增殖相关因子Ki-67的表达。与单独培养的类器官相比，共培养组中类器官的形成数量更多、直径更长且总面积更大（P<0.05）。在化疗药物5-氟尿嘧啶和奥沙利铂处理下，对照组的半数抑制浓度分别为10.66μmol/L和3.263μmol/L，而共培养组则分别为46.23μmol/L和91.11μmol/L；与对照组相比，共培养体系中类器官的Caspase-3/7阳性凋亡细胞明显减少。结论 胃癌类器官在与肿瘤相关成纤维细胞共培养时表现出更快的增殖速度和更强的耐药性，提示其共培养模型能更好地模拟体内肿瘤间质微环境。

关键词： 糖尿病视网膜病变   卵泡蛋白   腺苷酸活化蛋白激酶   视网膜色素上皮   氧化应激   炎症  

摘要： 目的 探讨卵泡蛋白（FLCN）对糖尿病视网膜病变（DR）发生发展及腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路的影响。方法 将人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19分为对照组、高糖组、shRNA对照（NC-sh）组、FLCN-shRNA(FLCN-sh)组、过表达对照（NC-oe）组和FLCN过表达（FLCN-oe）组。各组细胞转染后，对照组细胞在含正常葡萄糖（5 mmol/L）的培养基中培养48 h；其他组细胞均在含高葡萄糖（25 mmol/L）的培养基中培养48 h。采用CCK-8法检测细胞活力，EdU法检测细胞增殖，TUNEL法检测细胞凋亡。采用一次性腹腔注射1%链脲佐菌素（STZ）溶液（35 mg/kg）建立糖尿病大鼠模型，将糖尿病大鼠继续饲养1个月构建DR大鼠模型。造模后，将DR模型大鼠分为DR组、DR+NC-sh组和DR+FLCN-sh组，每组12只；另取12只正常大鼠作为对照组。对照组和DR组大鼠玻璃体腔注射20μL生理盐水，DR+NC-sh组和DR+FLCN-sh组大鼠分别玻璃体腔注射20μL的NC-sh和FLCN-sh，滴度为1×10～9 TU/mL，每隔7 d注射1次，共注射4次。HE染色观察视网膜形态，试剂盒检测ARPE-19细胞和大鼠视网膜组织中氧化应激指标[超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）]和炎症指标（TNF-α、IL-1β和IL-6）水平。采用qRT-PCR检测ARPE-19细胞和大鼠视网膜组织中FLCN mRNA水平。采用Western blot检测ARPE-19细胞和大鼠视网膜组织中FLCN、p-AMPKα、AMPKα、线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体融合蛋白1(MFN1)和线粒体融合蛋白2(MFN2)蛋白水平。结果 (1)与高糖组和NC-sh组比较，FLCN-sh组ARPE-19细胞中FLCN mRNA和蛋白水平降低（P<0.05），相对细胞活力和EdU阳性率升高（P<0.05），细胞凋亡率降低（P<0.05）,SOD、CAT和GSH-Px水平升高（P<0.05）,MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低（P<0.05）,p-AMPKα、TFAM、MFN1和MFN2蛋白水平升高（P<0.05）。与高糖组和NC-oe组比较，FLCN-oe组细胞中FLCN mRNA和蛋白水平升高（P<0.05），相对细胞活力和EdU阳性率降低（P<0.05），细胞凋亡率升高（P<0.05）,SOD、CAT和GSH-Px水平降低（P<0.05）,MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高（P<0.05）,pAMPKα、TFAM、MFN1和MFN2蛋白水平降低（P<0.05）。(2)与DR组和DR+NC-sh组比较，DR+FLCN-sh组大鼠视网膜组织中FLCN mRNA和蛋白水平降低（P<0.05），眼底新生血管明显减少，视网膜形态明显好转，视网膜组织中SOD、CAT和GSH-Px水平升高（P<0.05）,MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低（P<0.05），视网膜组织中p-AMPKα、TFAM、MFN1和MFN2蛋白水平升高（P<0.05）。结论 下调FLCN可减轻高糖诱导的ARPE-19细胞以及DR大鼠视网膜损伤，其机制可能与激活AMPK信号通路有关。

关键词： 脓毒症   丙酮酸激酶   一碳代谢   凋亡   犀角地黄汤  

摘要： 目的：研究犀角地黄汤（XJDHT）对脓毒症小鼠及细胞模型的作用，探究其通过调控丙酮酸激酶M2（PKM2）介导的一碳代谢途径缓解脓毒症炎症反应的分子机制。方法：将40只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组、犀角地黄汤低剂量组(5.1 g·kg-1)和高剂量组(10.2 g·kg-1)。各组连续灌胃1周后，除对照组外，采用盲肠穿刺结扎法（CLP）构建脓毒症动物模型。术后24 h统计各组死亡率，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清细胞因子，HE染色检测肺组织病理变化。体外实验中，将人单核巨噬细胞（THP-1）暴露于不同浓度犀角地黄汤，加入终浓度为2 mg·L-1的脂多糖（LPS）处理24 h。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记（TUNEL）试剂盒检测细胞凋亡水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）技术检测炎症因子肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达。转录组测序分析各组差异表达基因并进行基因本体富集分析。Western blot验证一碳代谢通路关键基因丙酮酸激酶M2（PKM2）、5-甲基四氢叶酸-高半胱氨酸甲基转移酶（MTR）、磷酸甘油酸脱氢酶（PHGDH）的表达，随后使用紫草素建立PKM2表达抑制模型，进一步分析相关蛋白表达变化。结果：动物实验显示，与对照组比较，模型组小鼠体温显著上升并出现肺部炎性病变（P<0.01），血清TNF-α和IL-1β水平大幅提高（P<0.01）。与模型组比较，犀角地黄汤高剂量组可降低脓毒症模型小鼠体温及肺组织损伤（P<0.05），同时显著降低血清TNF-α和IL-1β水平（P<0.01）。低剂量组小鼠体温无显著下降，血清TNF-α和IL-1β水平有所下降（P<0.05）。细胞实验表明，与对照组相比，模型组THP-1细胞TNF-α及IL-1β蛋白表达水平显著升高（P<0.01），Bax/Bcl-2表达水平比值下降（P<0.01），凋亡程度增加（P<0.01）；转录组测序及Western-blot结果表明TNF-α、IL-1β及代谢相关基因（PKM2、MTR、PHGDH）表达具有差异明显（P<0.01）。与模型组相比，犀角地黄汤高剂量组显著上调Bax/Bcl-2比值及PHGDH蛋白表达水平（P<0.01），有效减轻细胞凋亡程度（P<0.01），同时下调TNF-α、IL-1β、PKM2、MTR蛋白表达水平（P<0.01）。犀角地黄汤低剂量组Bax/Bcl-2比值及PHGDH蛋白表达水平上调（P<0.05），细胞凋亡程度有所减轻（P<0.05），IL-1β及MTR蛋白水平降低（P<0.05，P<0.01），但TNF-α及PKM2表达无明显差异。经紫草素抑制THP-1细胞PKM2蛋白表达后，检测一碳代谢相关蛋白表达。与空白组相比，LPS诱导模型组中PKM2表达显著上调（P<0.01），同时MTR蛋白表达显著升高（P<0.01），PHGDH表达显著下调（P<0.01）。与模型组相比，紫草素处理组PKM2表达显著降低（P<0.05），PHGDH表达显著上调（P<0.01），MTR表达显著下调（P<0.05）。结论：犀角地黄汤可抑制脓毒症炎症因子释放，其作用机制与其干预巨噬细胞PKM2介导的一碳代谢途径相关。

关键词： 葡萄籽原花青素   睾丸   组织结构   氧化应激   细胞凋亡   睾酮合成相关调控分子  

摘要： 本试验旨在探究饲粮中添加葡萄籽原花青素(GSPs)对氧化应激条件下公鸡睾丸组织结构、抗氧化能力、抗凋亡能力和睾酮合成相关调控分子表达的影响。试验选取90只健康、体重相近的30日龄康乐黄公鸡,随机分成3组,每组3个重复,每个重复10只鸡。利用敌草快(DQ)作为氧化应激诱导剂。对照(CON)组和DQ组饲喂基础饲粮(不添加GSPs),GSPs+DQ组在基础饲粮中添加400 mg/kg的GSPs。各组饲喂相应饲粮30 d后,DQ组和GSPs+DQ组公鸡一次性腹腔注射25 mg/kg BW的DQ,对照组公鸡一次性腹腔注射等剂量的生理盐水,12 h后采集各组公鸡睾丸样品。预试期7 d,正试期31 d。结果显示:1)各组之间终末体重、平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)均无显著差异(P>0.05)。2)与CON组相比,DQ组睾丸组织中核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),半氧合酶-1(HO-1)的mRNA相对表达量显著下调(P<0.05),过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量均显著升高(P<0.05);与DQ组相比,GSPs+DQ组睾丸组织中Nrf2和谷胱甘肽过氧化物酶1(Gpx1)的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。3)与CON组相比,DQ组睾丸组织生精小管中的生精细胞排列略为稀疏,生精小管间的睾丸间质细胞密度仍维持在较高水平;饲粮中添加GSPs可有效缓解DQ对公鸡睾丸组织结构的氧化损伤。4)与CON组相比,DQ组睾丸组织中B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的mRNA相对表达量均显著上调(P<0.05),Bax的蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的蛋白相对表达量显著下调(P<0.05);与DQ组相比,GSPs+DQ组睾丸组织中Bax、Caspase3的mRNA和蛋白相对表达量显著下调(P<0.05),Bcl-2的mRNA和蛋白相对表达量均显著上调(P<0.05)。5)与CON组相比,DQ组睾丸组织中类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450家族成员11A1(Cyp11a1)和3β-羟基类固醇脱氢酶1(Hsd3b1)的mRNA和蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05);与DQ组相比,GSPs+DQ组睾丸组织中StAR、Cyp11a1和Hsd3b1的mRNA和蛋白相对表达量显著上调(P<0.05)。由此可见,饲粮中添加GSPs可有效缓解DQ诱导的氧化应激对公鸡睾丸组织结构、抗氧化能力、抗凋亡能力和睾酮合成相关调控基因表达的损伤。

关键词： 卷柏   结直肠癌   增殖  

摘要： 目的：研究苗药卷柏（Selaginella tamariscina，SEL）提取物对人结肠癌SW480细胞凋亡、增殖和迁移的影响。方法：采用 CCK-8 法和EdU/Hoechst 33342荧光染色检测卷柏提取物对结直肠癌细胞SW480增殖的影响，利用结晶紫染色法观察结肠癌SW480细胞形态学变化，划痕实验观察细胞的迁移情况，采用流式细胞检测术，观察细胞周期和细胞凋亡变化。采用Western blot蛋白表达法检测p53、p21蛋白水平。结果：苗药卷柏提取物可呈浓度依赖性抑制SW480细胞活性，结晶紫染色法观察到实验组细胞数目随浓度的增高而减少，细胞间隙增宽，出现不同程度核固缩。Edu/ Hoechst 33342荧光染色法和划痕实验结果提示卷柏提取物抑制结直肠癌SW480细胞的增殖和迁移。流式细胞检测结果显示，卷柏提取物可阻滞SW480周期并诱导其凋亡。Western blot检测结果表明p53、p21蛋白条带灰度值随浓度的增高明显增强，提示卷柏提取物能够上调p53和p21的蛋白表达(P < 0.05)。结论：苗药卷柏提取物可能通过促进结直肠癌细胞的凋亡、阻滞细胞周期以抑制其增殖和迁移的作用，其作用机制可能与调控p53和p21蛋白表达有关。

关键词： HIV/AIDS湿热内蕴证   炎症   DAMPs   TLR4/NF-κB信号通路   三仁汤  

摘要： 目的：探究DAMPs/TLR4/NF-κB信号通路在HIV/AIDS湿热内蕴证炎症反应的作用机制和三仁汤的干预机制。方法：本研究选取某地区HIV/AIDS湿热内蕴证患者15例为实验组，健康人15例为对照组，HIV/AIDS湿热内蕴证患者接受中药三仁汤颗粒剂干预2个月。利用流式细胞技术，检测分析CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+/8+T等免疫学指标。运用Elisa、qPCR技术检测DAMPs/TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白及炎症因子和mRNA的表达情况。结果：与健康对照组相比，HIV/AIDS湿热内蕴证组CD4+T淋巴细胞数显著降低，CD4+/CD8+T比值发生倒置，CRP、TNF-α、IL-6、HSP60、S100A8/A9、TLR4、NF-κB等蛋白及NF-κB p65、HMGB1、HSP70、IL-1β、IL-8等mRNA表达均显著上升，差异具统计学意义（P < 0.05）。经三仁汤干预后，HIV/AIDS湿热内蕴证患者CD4+T淋巴细胞数回升，临床症状明显改善。同时，患者体内CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6、HMGB1、HSP60、S100A8/A9、TLR4、NF-κB等蛋白及NF-κB p65、HMGB1、HSP60、HSP70、IL-1β、IL-8等mRNA表达均显著降低，差异同样具有统计学意义（P < 0.05）。结论：DAMPs/TLR4/NF-κB信号通路在HIV/AIDS湿热内蕴证炎症反应中发挥重要作用，三仁汤可能通过抑制DAMPs/TLR4/NF-κB通路活化，减轻HIV/AIDS湿热内蕴证患者炎症反应。

关键词： 帕金森病   超声检查  

摘要： 经颅超声（TCS）显示黑质高回声是诊断帕金森病（PD）的关键影像学标志。为进一步规范及推广TCS用于PD，中国医师协会超声医师分会组织相关专家参考国内外循证医学证据、结合自身经验，共同讨论并制定中国PD TCS检查规范与诊断指南。

关键词： 循环风系统   污染物蓄积   循环风比例   理论计算   数值模拟  

摘要： 循环风系统可以充分利用空气的再输运能力，减小实时排放总量，因其节能减排特性而成为工业通风的重要选择。但循环风系统控制环境内存在污染物蓄积现象，目前针对受控环境污染物蓄积及循环风比例的精确控制研究尚不完善。改进循环风系统控制环境内污染物蓄积实时计算方法，基于铸造工业污染物散发的间歇性，提出不同工艺条件下循环风比例计算方法，动态调节循环风比例范围；通过CFD离散相模型（DPM）对受控环境内的污染物时空分布进行深入研究。结果表明，不同时刻模拟计算结果与理论计算值平均误差在15%以内，具有良好的一致性；循环风系统能有效降低新风量和除尘系统实时排放总量；循环风系统控制环境内污染物蓄积存在浓度上限，上限值由污染源源强、循环风比例、除尘器对污染物的过滤效率计算确定。此外，通过受控环境内不同循环风比例下污染物浓度变化的动态特性，选取合适的循环风比例，在节能的基础上，对于减少循环风系统控制环境内污染物蓄积至关重要。